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微生物實習(xí)報告

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微生物實習(xí)報告

林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院

實習(xí)報告

學(xué)生姓名:婁鈞翼學(xué)號:201*01220327專業(yè)名稱:生物科學(xué)微生物班級:生物科學(xué)102班指導(dǎo)教師:張昕

201*-6-26

一、實習(xí)目的意義

1、通過實習(xí)過程掌握酸奶中乳酸細菌的分離純化

2、土壤中自生固N菌分離、純化、生長曲線測定:通過實習(xí)過程,掌握土壤中微生物的分離、純化和生長曲線測定的技術(shù);

3、參觀臨安青山污水處理廠:參觀污水處理廠,了解其運行模式,以及在污水處理過程中微生物發(fā)揮的作用和技術(shù);

4、參觀富陽海正藥業(yè)有限公司:了解一個大公司大企業(yè)的運行情況,以及專業(yè)方面的一些技術(shù)和應(yīng)用。

二、實習(xí)地概況

1、第一個和第二個實驗是在學(xué)校學(xué)六實驗室完成的;

2、第三個實驗:臨安市青山污水處理有限公司成立于201*年3月21日,于201*年5月1日投入試運行,是一個集污水收集、處理于一體的公益事業(yè)企業(yè)。公司坐落于浙江省臨安市青山湖街道研口村發(fā)達畈,占地66畝,近期投資8082萬元,建成處理能力2萬噸/日,收集管網(wǎng)42公里,工藝采用MSBR法,具有脫氨除磷功能的污水處理設(shè)施。公司堅持內(nèi)抓管理強素質(zhì),外創(chuàng)先進塑形象,通過規(guī)范化、制度化、精細化、科學(xué)化的管理來不斷提高污水處理水平,努力提升科學(xué)管理層次,切實增強企業(yè)核心競爭力。公司設(shè)備、工藝先進,技術(shù)力量雄厚,現(xiàn)有職工21人,其中技術(shù)人員15人。公司先后通過了ISO9000和ISO14000質(zhì)量環(huán)境管理體系認(rèn)證及清潔生產(chǎn)認(rèn)證。同時被評為浙江省公眾滿意單位杭州市環(huán)境保護模范企業(yè)、臨安市花園式工廠、臨安市安全聲場先進單位、臨安市衛(wèi)生先進單位、臨安市綠色企業(yè)等榮譽稱號。

3、第四個實驗:占地16000平方米,累計投資超過2.6億元,設(shè)有60多個單元實驗室,集小試、中試與研發(fā)支持為一體。始創(chuàng)于1956年的浙江海正藥業(yè)股份有限公司秉承“執(zhí)著藥物創(chuàng)新,成就健康夢想”的使命和“成為廣受尊重的全球化制藥企業(yè)”的愿景,致力于整合藥物研發(fā)與生產(chǎn)資源,為全球客戶提供更好的產(chǎn)品和服務(wù),通過美國FDA、歐盟EDQM、澳大利亞TGA、韓國KFDA等官方認(rèn)證的品種達到40多個,銷往全球30多個國家和地區(qū)。

201*年,公司榮獲“全國五一勞動獎狀”,海正、HISUN及圖形被認(rèn)定為“中國馳名商標(biāo)”,入選“中國萬種微生物基因組計劃”和“國家重大(磅)級藥物品種產(chǎn)業(yè)化技術(shù)創(chuàng)新聯(lián)盟”。因圓滿完成“抗甲流藥物中間體生產(chǎn)”的國家任務(wù),受到省政府的通令嘉獎。

201*年,公司入選浙江省醫(yī)藥工業(yè)“十強企業(yè)”,并榮獲“國內(nèi)最佳產(chǎn)品線十佳工業(yè)企業(yè)”稱號,同時被譽為“金蜜蜂獎成長型企業(yè)”。

我們主要參觀了海正藥業(yè)在富陽的分公司。

三、材料方法

1、材料:乳酸細菌培養(yǎng)基、酸奶

原理:當(dāng)乳酸菌生長代謝出乳酸后,會是PH下降而使顏色由綠變?yōu)辄S綠,也由于PH

值降低,再加上抗生素及厭氧培養(yǎng)的作用,所以一般的微生物不容易在此培養(yǎng)基上生長。因此十分容易鑒別乳酸菌。

方法:1.1(6月7日)配備乳酸細菌培養(yǎng)基(蛋白胨10.0G,牛肉膏10.0G,酵母膏5.0G,

檸檬酸氫二銨2.0G,葡萄糖20.0G,吐溫801.0ML,乙酸鈉5.0G,磷酸氫二鉀2.0G,硫酸鎂0.58G,硫酸錳0.25G,瓊脂18.0G,蒸餾水1000ML,PH6.26.6)

1.2(6月7日)培養(yǎng)基滅菌

1.3(6月8日)用滅菌后冷卻至50攝示度左右的培養(yǎng)基到成平板

1.4(6月8日)用滅菌過的接種環(huán)挑取酸奶在平板上劃線純化培養(yǎng)4天左右1.5(6月12日)挑取平板上菌落制成臨時裝片觀察

2、材料:阿須貝無氮培養(yǎng)基、土壤

方法:2.1(6月12日)配備阿須貝無氮培養(yǎng)基(葡萄糖10.0G,磷酸氫二鉀0.2G,硫酸

鎂0.2G,氯化鈉0.2G,CaSO4’2H2O;0.1G,碳酸鈣5G,瓊脂18G,蒸餾水1000ML,PH7.2)阿須貝無氮培養(yǎng)液(葡萄糖10.0G,磷酸氫二鉀0.2G,硫酸鎂0.2G,氯化鈉0.2G,CaSO4’2H2O;0.1G,碳酸鈣5G,蒸餾水1000ML,PH7.2)

2.2(6月12日)培養(yǎng)基,培養(yǎng)液滅菌

2.3(6月12日)用滅菌后冷卻至50攝示度左右的阿須貝無氮培養(yǎng)基到成平板2.4(6月12日)用滅菌過的鑷子將黃豆大小的菜園土埋入已冷凝的平板培養(yǎng)基上2.5(6月12日)正面放置28度培養(yǎng)4天

2.6(6月18日)用滅菌過的接種環(huán)挑取菌苔在新的阿須貝平板上劃線純化32度

培養(yǎng)

2.7(6月20日)單菌落接入液體培養(yǎng)基中于12.24.36.48H后測吸光值.制備生長

曲線

四、結(jié)果分析

1.平板上有一個個單菌落.在顯微鏡下觀察單菌落就只有一種乳酸菌.酸奶中有保加利亞乳

菌與嗜熱鏈球菌二種.2.

五、實習(xí)感受

通過此次實習(xí),我學(xué)到了很多課堂上學(xué)不到的東西:親自動手配培養(yǎng)基,分離、純化菌類,

學(xué)會使用分光光度計制作生長曲線,同時參觀了一些與微生物緊密相連的公司,了解其運行模式、實踐技術(shù)和應(yīng)用。這讓我清楚地感到了自己肩上的重任,看清了自己的人生方向,也讓我認(rèn)識到了科研工作應(yīng)支持仔細認(rèn)真的工作態(tài)度,要有一種平和的心態(tài)和不恥下問的精神,不管遇到什么事都要去思考,多聽別人的建議,不要太過急燥,要對自己所做的事去負(fù)責(zé),不要輕易地去承諾,承諾了就要努力去兌現(xiàn)。實習(xí)也培養(yǎng)了我的實際動手能力,增加了實際的操作經(jīng)驗,對實際的科研工作的有了一個新的開始,更好地為我們今后的工作積累經(jīng)驗。

我知道科研工作是一項需要熱情的事業(yè),并且要持之以恒的精神和吃苦耐勞的品質(zhì)。我覺得重要的是在這段實習(xí)期間里,我第一次真正地接觸了實驗,在實踐中了解了一些科研技術(shù),并且在此期間,我參觀了一些公司,也與社會有所接觸。利用這次難得的機會,也打開了視野,增長了見識,為我們以后進一步走向社會打下堅實的基礎(chǔ)。

實習(xí)期間,我從末出現(xiàn)無故缺勤。我認(rèn)真聽取老師的指導(dǎo),對于別人提出的實驗建議虛心聽取,并能夠仔細觀察、切身體驗、獨立思考、綜合分析,并努力把學(xué)到的知道應(yīng)用到實際實驗操作中去,盡力做到理論和實際相結(jié)合的最佳狀態(tài),培養(yǎng)了我的耐心和素質(zhì)。

為期兩個多星期的實習(xí)結(jié)束了,我在兩個多星期的實習(xí)中學(xué)到了很多在課堂上根本就學(xué)不到的知識,受益匪淺。回想自己在這期間的實習(xí)情況,也有不足之處。對此我思考過,學(xué)習(xí)經(jīng)驗自然是一個因素,然而更重要的是心態(tài)的轉(zhuǎn)變沒有做到位,有些實驗步驟還是停留在應(yīng)付的層面上,F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)了這個不足之處,應(yīng)該還算是及時吧,因為我明白了何謂工作何謂實際。在接下來的日子里,我會朝這個方向努力,在實驗操作方面我會更加謹(jǐn)慎。

本次實習(xí)是我第一次親身感受了所學(xué)知識與實際的應(yīng)用,理論與實際的相結(jié)合,讓我們大開眼界,也算是對以前所學(xué)知識的一個初審吧!這次實習(xí)對于我們以后學(xué)習(xí)、找工作也真是受益匪淺。我會把這此實習(xí)作為我人生的起點,在以后的工作學(xué)習(xí)中不斷要求自己,完善自己,讓自己做的更好。

擴展閱讀:微生物實習(xí)報告

一.了解實驗設(shè)備工作及使用方法

潔凈工作臺

室內(nèi)空氣經(jīng)預(yù)過濾器和高效除塵后以垂直或水平層流狀態(tài)通過工作臺的操作區(qū),操作臺保持無菌狀態(tài)。工作前后,要用紫外線照射15min。使用時,關(guān)掉紫外燈,打開工作燈;用酒精棉球擦手,一切操作都要在酒精燈火焰周圍。高壓蒸汽滅菌鍋

立式高壓蒸汽滅菌鍋。一般在0.11MPa的壓力下,121℃滅菌20min。培養(yǎng)箱

恒溫培養(yǎng)箱搖床

氧氣的傳遞較好,培養(yǎng)好養(yǎng)性微生物。

二.菌種分離

(一)實驗?zāi)康?/p>

1.掌握培養(yǎng)基的配方及配置方法。

2.掌握稀釋涂布平板法和分離純化微生物的基本操作技術(shù)。(二)基本原理

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基使一種廣泛和最普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。牛肉膏提供碳源、能源、磷酸鹽和維生素,蛋白胨提供氮源和維生素,NaCl提供無機鹽,瓊脂作為凝固劑。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏10g蛋白胨20gNaCl10g瓊脂36g水201*mlpH7.0~7.2

高氏1號培養(yǎng)基是分離和培養(yǎng)放線菌的合成培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基數(shù)由可溶性淀粉(作為碳源)、KNO3、NaCl、K2PO44H2O、MgSO47H2O(作為微量元素,提供鈉、磷、鎂、硫等離子)和FeSO47H2O(作為微量元素,提供鐵離子)等組成。由于磷酸鹽和鎂鹽相混合時產(chǎn)生沉淀,因此,在混合培養(yǎng)基成分時,一般是按配方的順序依次溶解各成分。

高氏1號培養(yǎng)基可溶性淀粉KNO320gNaCl1gK2PO44H2O0.5gMgSO47H2O0.5gFeSO47H2O0.5g瓊脂20g水1000mlpH7.4~7.6(三)材料

1.溶液或試劑:牛肉膏,蛋白胨,NaCl,瓊脂,1mol/LNaOH,1mol/LHCl,可溶性淀粉,KNO3,K2PO44H2O,MgSO47H2O,F(xiàn)eSO47H2O

2.儀器或其它用具:8個盛9ml水的試管,2個盛90ml水的三角瓶,1涂棒,接種環(huán),7個培養(yǎng)皿,8個移液管,一人一個試管。(四)步驟1.配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(依次加入,瓊脂最后加,配好后測pH,用緩沖液調(diào)節(jié)pH),然后分裝20個三角瓶。將配好的高氏1號培養(yǎng)基加入試管中。

2.把培養(yǎng)基和試管,以及所有的用具都滅菌。在0.11MPa的壓力下,121℃滅菌20min。(水中細菌總數(shù)的測定時用的器材也一起滅菌)。把加入培養(yǎng)基的試管擺好斜面。

3.稀釋涂布平板法

(1)制備菌液在潔凈工作臺上進行。在酒精燈旁邊,吸取10ml菌液注入盛90ml水的三角瓶中,搖勻。

(2)倒平板在潔凈工作臺上進行。方法是右手持盛培養(yǎng)基的三角瓶,置火焰旁邊,左手拿平培養(yǎng)皿(小指和無名指托住皿底,中指和大拇指卡住皿蓋邊緣,食指放在皿蓋上)。然后左手將培養(yǎng)皿在火焰旁打開一縫,迅速倒入培養(yǎng)基至能鋪滿皿底,輕輕搖動培養(yǎng)基是培養(yǎng)基均勻分布,至于桌面上。再將三角瓶口的培養(yǎng)基在酒制備稀釋液在酒精燈火焰上燒干。

(3)涂布在潔凈工作臺上進行。等培養(yǎng)基凝固之后,在7個培養(yǎng)皿上分別標(biāo)出10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,10-7。首先吸取1ml的菌液加入有99ml的三角瓶中搖15min,然后用先滅菌好的裝有9ml無菌水的試管稀釋(用一支移液管先吸取1ml的稀釋菌液加入9ml無菌水的試管中,搖勻,再將稀釋過的菌液取0.5ml加入培養(yǎng)皿,然后用無菌涂棒在培養(yǎng)基表面輕輕涂布均勻。(依次類推其他梯度)。

(4)培養(yǎng)將涂布好的培養(yǎng)基放置37℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24小時。(5)轉(zhuǎn)移保藏(6月5號)(五)結(jié)果分析(6月5號)(六)討論

注意事項:一定要倒置培養(yǎng),以防培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的水滴入培養(yǎng)皿,把培養(yǎng)皿中的菌體相互污染。

三.水中細菌總數(shù)的測定

(一)目的

1.學(xué)習(xí)水中細菌總數(shù)測定方法。2.學(xué)習(xí)稀釋混合平板法(傾注平板法)。(二)原理

傾注平板法測定水中的菌總數(shù),以一定培養(yǎng)基平板上生長出來的菌落計算出來的菌總數(shù)僅是一種近似值。采用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。(三)材料

牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,5個培養(yǎng)皿,6支裝有9ml水的試管,5支移液管

(四)步驟

1.滅菌(與上一個實驗一起滅菌)。

2.與稀釋涂布平板法大部分相同,不同的是,做5個梯度,10-1,10-2,10-3

,10-4,10-5,并且先吸取每個梯度的菌液加入培養(yǎng)皿中,然后加入冷卻至45℃

的培養(yǎng)基,搖勻,使樣品中的微生物和培養(yǎng)基充分混合均勻,待冷卻凝成平板后,分別在37℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24小時。(五)結(jié)果分析

在5個梯度的平板中,只有101的平板上長出一個菌落,則1ml水中約有10個細菌。(六)討論

1.只有101的平板上長出一個菌落,以此計數(shù)相當(dāng)?shù)牟粶?zhǔn)確,應(yīng)當(dāng)加做實驗再測定水中細菌總數(shù)?梢砸栽阂约2-1,4-1,8-1,16-1為梯度再用稀釋平板法測定計數(shù)。

2.應(yīng)當(dāng)取湖泊水或者是河流水,細菌較多。自來水已經(jīng)經(jīng)過消毒滅菌。

四.酵母菌生長曲線的測定

(一)目的

1.學(xué)會制備液體培養(yǎng)基。

2.熟悉并掌握以血球計數(shù)板進行微生物技術(shù)的基本方法。3.學(xué)會繪制微生物生長曲線。(二)原理YPD培養(yǎng)基是適用于實驗培養(yǎng)酵母菌的液體培養(yǎng)基。酵母膏幫助新酵母菌延滯期的生長,蛋白胨為微生物提供氮源,葡萄糖為酵母菌復(fù)制繁殖提供營養(yǎng)和能量。YPD培養(yǎng)基酵母膏1%蛋白胨2%葡萄糖2%pH5.8~6.2(三)材料

酵母膏,蛋白胨,葡萄糖,三角瓶(每人一個),5ml移液管,血球計數(shù)板,酵母菌懸液(四)步驟

1.制備培養(yǎng)基,分裝三角瓶中,每瓶100ml.,用帶有濾紙的封口膜扎口,外加兩層報紙。

2.滅菌將三角瓶和移液管在0.11MPa的壓力下,121℃滅菌20min。3.接菌在潔凈工作臺上進行。在酒精燈火焰旁,移取5ml酵母菌懸液加入冷卻后的液體培養(yǎng)基中。扎口時,去掉兩層報紙,然后,放搖床上37℃恒溫培養(yǎng)。

4.計數(shù)從接上酵母菌開始,第一次測酵母菌個數(shù),此后每過4小時測一次,用血球計數(shù)板測,一個三角瓶測一次數(shù)據(jù)。如果菌液中個數(shù)過多,就用9ml的無菌水稀釋,再測。(五)結(jié)果分析(6月6號)時間h01.917個數(shù)×10832時間個數(shù)1.35×101043.7×108361.79×101089.1×108401.42×1010123.488×109441.76×1010161.2×109481.32×1010201.63×1010521.8×1010241.32×1010561.92×1010282.62×1010601.1×10lgN1110.5109.598.5801020酵母菌生長曲線3040506070時間(h)

(六)討論

血球計數(shù)板清洗要干凈,加入血球計數(shù)板中的菌液不可加過多,計數(shù)時要速度快。

五.菌種形態(tài)學(xué)鑒定及轉(zhuǎn)移保存

(一)目的

1.學(xué)習(xí)描述菌落特征方法。

2.學(xué)習(xí)把細菌轉(zhuǎn)移保存(從培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移至試管)。3.學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏顏色和芽孢染色方法。(二)原理

菌落形態(tài)是指某種微生物在一定的培養(yǎng)基上有單菌體形成的群體形態(tài)。每一種微生物在一定的培養(yǎng)條件下形成的菌落個具有某些相對的特征,利用觀察這些特征來區(qū)分各大類微生物。

革蘭氏染色原理革蘭氏染色是細菌分離和鑒定的重要性質(zhì)。染色反應(yīng)呈藍紫色的成為革蘭氏陽性,紅色成為革蘭氏陰性。主要區(qū)別在于細胞壁,革蘭氏陽性菌的細胞壁是由肽聚糖形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通透性比較低,在染成紫色后,不容易用酒精脫色,則成藍紫色。陰性菌相反則成紅色。芽孢染色原理利用細菌的芽孢和菌體對染料的親和力不同的原理,用不同燃料進行染色,使芽孢和菌體呈現(xiàn)不同的顏色而便于區(qū)分。芽孢壁厚,通透性低,著色脫色均較困難。孔雀石綠在加熱條件下可以進入菌體和芽孢,菌體中的染料經(jīng)水洗脫色,芽孢不易脫色,再用番紅復(fù)染,則菌體和芽孢區(qū)別開來。(三)材料

培養(yǎng)有細菌的培養(yǎng)皿,裝有培養(yǎng)皿的試管,顯微鏡,載玻片,試管,水浴鍋,孔雀石綠,番紅,酒精,碘液,結(jié)晶紫(四)步驟

1.菌落形態(tài)觀察(1)大。捍、中、小。(2)形態(tài):圓形、不規(guī)則形。(3)干濕:干燥、濕潤、粘稠。(4)高度:扁平、隆起、凹下。(5)透明度:透明、不透明。

(6)顏色:白色、乳白色、黃色、金黃色、綠色、紅色、褐色等。(7)邊緣:整齊、不整齊。2.革蘭氏染色

①初染加結(jié)晶紫一滴,約1~2min,水洗。②媒染滴加碘液沖去殘水,并覆蓋約1min,水洗。

③脫色將玻璃板上的水甩干凈,襯以白背景,用95%酒精滴洗至剛剛不出現(xiàn)藍色為止,立即用水沖洗。

④復(fù)染用番紅染約1~2min,水洗。

⑤鏡檢干燥后,置油鏡觀察。革蘭氏陽性呈紫色,陰性呈紅色,以散開的細菌革蘭氏染色為準(zhǔn),過于密集,常常呈現(xiàn)假陽性。

3.芽孢染色①滴幾滴蒸餾水于試管中,用接種環(huán)刮取菌落在水中攪拌,之后加入幾滴孔雀石綠,置沸水浴10min。

②然后用接種環(huán)蘸取菌液在載玻片上涂抹,等干燥,過火兩下固定,水洗至孔雀石綠不再褪色為止。

③用番紅復(fù)染1min。

④待干燥后,置油鏡觀察,芽孢呈綠色,菌體呈紅色。

4.轉(zhuǎn)移保存在潔凈工作臺上進行,在酒精燈火焰旁邊,將找到的菌種挑取一部分,在試管中從底部Z字型畫線,之后燒一下試管口,棉塞過火,然后塞住試管。放置37℃恒溫箱中培養(yǎng)。之后放入冰箱中保藏。(五)結(jié)果分析

菌落形態(tài):中;圓形;濕潤;扁平;不透明;白色;邊緣不整齊。顯微鏡觀察:芽孢染色觀察不清楚

革蘭氏染色呈紫色,革蘭氏陽性。呈鏈球菌狀

(六)討論

用酒精清洗時不能時間過長,會出現(xiàn)假陰性結(jié)果。但清洗不干凈,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。六.抗性菌株誘變

(一)目的

1.觀察誘變隨微生物的殺菌和誘變雙重生物學(xué)效應(yīng)。2.學(xué)會用紫外線對微生物誘變。(二)原理

紫外線輻射能引起DNA鏈的斷裂、DNA內(nèi)分子交聯(lián),從而導(dǎo)致細胞死亡或基因突變,其中形成嘧啶二聚體是導(dǎo)致基因突變的主要原因。由于存在光復(fù)活作用,鼓誘變處理及處理后的培養(yǎng)均應(yīng)避免可見光照射(誘變處理應(yīng)在紅光下操作)。通常用照射時間或細胞致死率表示相對計量。(三)材料

磁力攪拌器,涂布棒,培養(yǎng)皿,移液管,牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基(四)步驟

1.器材滅菌涂布棒,培養(yǎng)皿,移液管,牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,在0.11MPa的壓力下,121℃滅菌20min。

2.菌懸液制備在潔凈工作臺上進行,在酒精燈旁邊,把長有蠟樣芽胞桿菌菌落的試管移近酒精燈,打開瓶塞,把準(zhǔn)備好的生理鹽水打開,倒入試管中至淹沒大半試管中培養(yǎng)基的斜面,然后把裝生理鹽水的瓶放在酒精燈旁,把接種環(huán)灼燒后,貼壁移入試管中,在培養(yǎng)基平面Z字型畫線,將菌種刮下,盡量不要刮下培養(yǎng)基,然后將試管中水倒入原來生理鹽水的瓶中,再將生理鹽水倒入試管,之后倒回生理鹽水瓶中。搖勻。菌懸液制成。

3.倒平板在潔凈工作臺上進行,在酒精燈火焰旁,把牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基加入培養(yǎng)皿,并斜置,是培養(yǎng)基在在培養(yǎng)基中成斜面,冷卻后,將20ml青霉素液體加入200ml的培養(yǎng)基的三角瓶中,搖勻,在將此培養(yǎng)基加入培養(yǎng)基中,使與原來冷卻的培養(yǎng)基同樣高,置于桌面上冷卻。

4.誘變處理取約15ml菌懸液于無菌培養(yǎng)皿中(內(nèi)置磁棒),打開紫外燈,將培養(yǎng)皿放在磁力攪拌器上,開啟磁力攪拌器,取下培養(yǎng)皿蓋,開始計時,分別用5個培養(yǎng)皿做2min,4min,6min,8min,10min,處理。之后分別將5個處理的菌液接種在不同的培養(yǎng)皿中,做好標(biāo)簽。用黑紙包好,放置在34℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

5.觀察菌落(五)結(jié)果分析

在誘變時間為2min,4min,6min分別有細小菌落出現(xiàn)。8min,10min沒有菌落出現(xiàn),導(dǎo)致菌體死亡。(六)討論

可進行細小菌落進行在培養(yǎng),以便觀察其誘變是否產(chǎn)生形態(tài)學(xué)變化。

七.抗生素的效價測定

(一)目的

學(xué)習(xí)并掌握牛津杯和濾紙法(管碟二劑量)測定抗生素的效價。(二)原理

瓊脂平板擴散法來測青霉素的效價。將規(guī)格一定的不銹鋼小管(牛津杯)或濾紙置于帶菌瓊脂平板上,管中加入抗生素,在室溫條件下擴散半個小時后放入恒溫箱中培養(yǎng),在菌體生長的同時,被抗生素擴散到瓊脂夾板內(nèi),一直或殺死周圍菌體,從而產(chǎn)生不長菌的透明抑菌圈。在一定的范圍內(nèi),抗菌物質(zhì)的濃度(對數(shù)值)與抑菌圈直徑呈直線關(guān)系。因此,根據(jù)抑菌圈直徑的大小,可以求出相對應(yīng)的抗菌物質(zhì)的效價。(三)材料

蠟樣芽孢桿菌菌懸液,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,青霉素(高劑量、低劑量)。不銹鋼小管,濾紙,培養(yǎng)皿,鑷子,直尺,滴管,試管等(四)步驟

1.在潔凈工作臺上進行,在酒精燈火焰旁,先在培養(yǎng)皿中加入一層牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,使覆蓋底部。冷卻后,再將準(zhǔn)備的含有菌體加入培養(yǎng)基,再將含菌培養(yǎng)基加入培養(yǎng)皿。每組做五個平板。菌液培養(yǎng)基的高度盡量相同。2.將培養(yǎng)皿底部劃線分四部分,牛津杯放在四部分中間,分別加入SH,TH,SL,TL(順時針)溶液至滿而不溢出;蛘呤,經(jīng)滴有SH,TH,SL,TL溶液的濾紙順時針放置于培養(yǎng)基的四部分中間。放置半小時后,放入恒溫培養(yǎng)箱中

(五)結(jié)果分析

123平均值(1)求出W和V:

(2)W=(SH+TH)-(SL+TL)=0.87(3)V=(TH+TL)-(SH+SL)=0.63式中:TH:供試品高劑量之抑菌圈直徑TL:供試品低劑量之抑菌圈直徑SH:標(biāo)準(zhǔn)品高劑量之抑菌圈直徑SL:標(biāo)準(zhǔn)品低劑量之抑菌圈直徑

THd(cm)3.53.03.13.2SHd(cm)2.72.92.82.8SLd(cm)2.62.62.72.63TLd(cm)2.42.62.52.求出θ:(2)θ=Dantilog(IV/W)=1×artilog(0.63×lg2/0.87)=-1.51556

θ:供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的效價比

D:標(biāo)準(zhǔn)品高劑量與供試品高劑量之比,一般為1I:高低劑量之比的對數(shù),即log2或log4。求出Pr:(5)Pr=Ar×θ=-120.925Pr:供試品實際單位數(shù)Ar:供試品標(biāo)示量或估計單位(六)討論

這個實驗的培養(yǎng)基制備時要快,制作均勻,會減小誤差。

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