細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)考試總結(jié)

名詞解釋

1.滲透壓：水從低滲溶液穿過半透膜進(jìn)入高滲溶液時(shí)產(chǎn)生的壓力。水分子通過半透膜向溶

液擴(kuò)散的現(xiàn)象稱為滲透現(xiàn)象，簡稱滲透；溶液促使膜外水分子向內(nèi)滲透的力量即為滲透壓。

2.高滲：體內(nèi)的滲透壓高于體外，水由環(huán)境中向體內(nèi)擴(kuò)散，體內(nèi)的鹽分向外擴(kuò)散。

通過排泄作用排出多余的水，鹽分通過食物和組織攝入。

3.低滲：體內(nèi)的滲透壓低于體外，水由體內(nèi)向環(huán)境中擴(kuò)散，環(huán)境中的鹽分向內(nèi)擴(kuò)散。水和

鈉同時(shí)缺失，但缺水少于缺鈉，血清鈉低于正常范圍，細(xì)胞外液呈低滲狀態(tài)

4.凝集素：是一類含糖的并能與糖專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的

作用。凝集素使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞表面的糖分子連接，在細(xì)胞間形成“橋”的結(jié)果，加入與凝集素互補(bǔ)的糖可以抑制細(xì)胞的凝集。

5.差速離心：利用不同物質(zhì)沉降速率的差異，在不同離心速度下分離和收集不同顆粒的離

心技術(shù)。常用于分離細(xì)胞勻漿中的各種細(xì)胞器。6.熒光：某些物質(zhì)在一定短波長的光的照射下吸收光能進(jìn)入激發(fā)態(tài)，從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)，

就能在極短的時(shí)間內(nèi)放射出比照射光波長更長的光，這種光成為熒光。

7.自發(fā)熒光：有些生物體內(nèi)的物質(zhì)受激發(fā)光照射后可直接發(fā)出熒光，成為自發(fā)熒光。8.次生熒光：有的生物材料本身不發(fā)熒光，但它吸收熒光材料后同樣也能發(fā)出熒光，這種

熒光稱為次生熒光。

9.活體染色：是指對生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色但又無害的一種染色方法。分為體內(nèi)

染色和體外染色（超活染色）。

10.細(xì)胞培養(yǎng)：在實(shí)驗(yàn)室中用無菌操作的方法將動(dòng)物體內(nèi)的組織（或器官）取出，模擬動(dòng)物

體內(nèi)的生理?xiàng)l件，在體外進(jìn)行培養(yǎng)，使其不斷地生長、繁殖，人們借以觀察細(xì)胞的生長、繁殖、細(xì)胞分化以及細(xì)胞衰老等過程的生命現(xiàn)象。

11.組織培養(yǎng)：從機(jī)體分離出的組織或細(xì)胞在體外人工條件下培養(yǎng)生長的技術(shù)。

12.原代細(xì)胞培養(yǎng)：是指直接從動(dòng)物體內(nèi)獲取的細(xì)胞、組織或器官，經(jīng)體外培養(yǎng)后，直接到

第一次傳代為止。

13.傳代細(xì)胞培養(yǎng)：是指細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶以1:2或1:2以上的比例轉(zhuǎn)移接種到另一培養(yǎng)瓶

的培養(yǎng)。原代培養(yǎng)形成的單層細(xì)胞匯合以后，需要進(jìn)行分離培養(yǎng)，否則細(xì)胞會(huì)因生成空間不足或由于細(xì)胞密度過大引起營養(yǎng)枯竭，都將影響細(xì)胞的生長，這一程序常稱為傳代或傳代培養(yǎng)。

原理：1.細(xì)胞骨架原理細(xì)胞骨架是細(xì)胞內(nèi)以蛋白質(zhì)纖維為主要成分的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。根據(jù)蛋白質(zhì)纖維的直徑，組成成分和組裝結(jié)構(gòu)的不同可分為微絲微管和中等纖維，其對于維持細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)物質(zhì)運(yùn)輸，能量轉(zhuǎn)換，信號傳導(dǎo)和細(xì)胞分裂等有重要的作用，本實(shí)驗(yàn)采用去垢劑TritonX-100的緩沖液處理植物材料，可將細(xì)胞膜的膜結(jié)構(gòu)和大部分蛋白質(zhì)抽提調(diào)，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)蛋白卻被保存下來，后者用R250染色在光學(xué)顯微鏡下可見一種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。

為什么用TritonX-100不用SDS

因?yàn)門ritonX-100為去污劑，把骨架蛋白以外細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)蛋白剝離掉，無離子性。SDS有離子性，去污性強(qiáng)容易破壞細(xì)胞膜。PBS作用：PH保證、與細(xì)胞滲透壓相近。戊二醛作用：固定蛋白，保證細(xì)胞形狀�？捡R斯亮藍(lán)R250作用:與蛋白特異性結(jié)合。2．細(xì)胞凝集反應(yīng):

在某一種蛋白如土豆中，有多個(gè)位點(diǎn)可以與其他細(xì)胞結(jié)合，而且蛋白之間可以聚集，使多個(gè)細(xì)胞聚集在一起。以PBS液加2%血細(xì)胞液作對照試驗(yàn)因?yàn)樘�稀不容易使紅細(xì)胞凝集，太濃分辨不出來是自身堆積在一起還是由于凝集素使其凝集在一起。

3.Feulgen染色原理DNA經(jīng)弱酸水解，其上的嘌呤堿和脫氧核糖之間的鍵打開，使脫氧核糖的一端形成游離的醛基，這些醛基在原位與Schiff試劑反應(yīng)，形成紫紅色的化合物，使細(xì)胞內(nèi)含有DNA的部位呈紫紅色陽性反應(yīng)。紫紅色的產(chǎn)生，是由于反應(yīng)物的分子內(nèi)含有醌基，醌基是一個(gè)發(fā)色團(tuán)，所以具有顏色。對照組預(yù)先用熱三氯醋酸或DNA酶處理，抽提去細(xì)胞中的DNA而得到陰性反應(yīng)，從而證明了Feulgen的專一性。亞硫酸配制：10%偏重亞硫酸鈉水溶液5ml。蒸餾水100ml。1mol/LHCL5ml。

4.傳代細(xì)胞培養(yǎng)原理第一步制備細(xì)胞懸液，當(dāng)細(xì)胞生長成致密單層時(shí)，它很容易被蛋白水解酶和EDTA所破壞。因?yàn)镋DTA對鈣、鎂離子具親和力，而這兩種離子又是細(xì)胞保持緊密結(jié)合所必需的因素。所以一般采用胰蛋白酶和EDTA的混合物，作為消化液。培養(yǎng)基用EMEM液(90%)犢牛血清(10%)雙抗、3%谷氨酰胺1ml、7.4%NaHCO3（PH7.0~7.2）.其核心是培養(yǎng)基與消化液（0.02%EDTA或0.004%EDTA+0.5%胰蛋白酶液各一半）。主要步驟是消化與分裝。5.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：一便于研究各種物理，化學(xué)等外界因素對細(xì)胞生長發(fā)育和分化等的影響，二便于對細(xì)胞生長及發(fā)育過程的觀察

細(xì)胞培養(yǎng)必須滿足兩個(gè)條件：一是供給細(xì)胞存活所必須的條件，二是嚴(yán)格控制無菌條件

6.ABO血型用已知的IgM類特異抗體（標(biāo)準(zhǔn)血清）與被檢紅細(xì)胞在室溫條件下、鹽水介質(zhì)中反應(yīng)，根據(jù)紅細(xì)胞是否出現(xiàn)凝集現(xiàn)象來測定被檢紅細(xì)胞膜上有無與血型抗體相對應(yīng)的抗原，從而判斷和鑒定被檢者的血型。大部分為RH陽性。正定型反定型

被

（標(biāo)準(zhǔn)（標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞+被檢者血

檢

血清+清）

者

被檢者

血

紅細(xì)

型

胞）

O型

抗抗A型紅B型紅

紅細(xì)

AB細(xì)胞細(xì)胞

胞

＋－A－＋－－＋B＋－－＋＋AB－－－－－O＋＋－7.細(xì)胞融合原理

掌握利用聚乙二醇為介導(dǎo)物對各類細(xì)胞的融合方法。聚乙二醇分子能改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，由于兩細(xì)胞接口處雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用，使細(xì)胞發(fā)生融合。

影響融合率的因素1.溫度2.PEG分子量3.細(xì)胞融合時(shí)PEG濃度。4.PEG作用時(shí)間5.所要進(jìn)行融合細(xì)胞種類。8.流式細(xì)胞儀原理

流式細(xì)胞儀的工作原理是將待測細(xì)胞放入樣品管中，在氣體的壓力下進(jìn)入充滿鞘液的流動(dòng)室。在鞘液的約束下細(xì)胞排成單列由流動(dòng)室的噴嘴噴出，形成細(xì)胞柱。通過對流動(dòng)液體中排列成單列的細(xì)胞進(jìn)行逐個(gè)檢測，得到該細(xì)胞的光散射和熒光指標(biāo)，分析出其體積、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、RNA、蛋白質(zhì)、抗原等物理及化學(xué)特征。作用：1、計(jì)數(shù)2、測細(xì)胞周期3、測特異性蛋白影響其測量效果因素：9.細(xì)胞膜屏蔽哪些：

鹽、無機(jī)離子、極性大分子。

允許進(jìn)入：脂溶性、水、非極性、有機(jī)小分子、NH4+10.線粒體和液泡的染色

堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料膠粒表面帶陰離子，而被染得部分本身也是具有陰離子或陽離子，這樣他們彼此之間就能發(fā)生吸引作用，一般以堿性染料最為適用，可能因?yàn)樗�具有溶解在脂類的特性，易于被�?xì)胞吸收。詹納斯綠B和中性紅兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對于線粒體和葉泡系的染色各有專一性11.葉綠體分離與熒光觀察將組織勻漿后懸浮在等滲介質(zhì)中進(jìn)行差速離心，是分離細(xì)胞器的常用方法（先1000r/min2min棄沉淀再3000r/min5min棄上清）12.細(xì)胞膜的滲透性原理

將紅細(xì)胞放入數(shù)種等滲溶液中，由于紅細(xì)胞對各種溶質(zhì)的透性不同，有的溶質(zhì)可以深入，有的溶質(zhì)不能滲入，滲入的溶質(zhì)能提高紅細(xì)胞的滲透壓，所以促使水分進(jìn)入細(xì)胞，引起溶血。由于溶質(zhì)投入速度不同，因此溶血時(shí)間也不同。

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