細(xì)胞生物學(xué)研究方法部分總結(jié)

合肥學(xué)院

201*屆《細(xì)胞生物學(xué)》階段性總結(jié)

題目第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法部分總結(jié)

姓名：崔俏俏專(zhuān)業(yè)：生物工程

班級(jí)：12級(jí)生物工程（1）班學(xué)號(hào)：120201*027指導(dǎo)教師：李老師

201*年10月22日

第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法

學(xué)習(xí)細(xì)胞生物學(xué)研究方法，了解實(shí)驗(yàn)原理，掌握基本實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)于學(xué)習(xí)

細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)，加深對(duì)理論學(xué)說(shuō)的理解，以及進(jìn)行創(chuàng)新性研究，推動(dòng)本學(xué)科和相關(guān)學(xué)科的不斷發(fā)展都具有重要的意義。

細(xì)胞生物學(xué)的研究方法和實(shí)驗(yàn)技術(shù)很多，根據(jù)研究方法的性質(zhì)、特點(diǎn)、應(yīng)用范疇和實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理、類(lèi)型及條件的相關(guān)性和類(lèi)同性，可以將其主要的研究方法和實(shí)驗(yàn)技術(shù)分為以生物有機(jī)體組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)自然狀態(tài)為主體的形態(tài)學(xué)研究方法、細(xì)胞化學(xué)研究方法和模擬體內(nèi)環(huán)境、以實(shí)驗(yàn)性設(shè)計(jì)為特色的綜合性研究方法和分子生物學(xué)技術(shù)等。

第一節(jié)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀(guān)察方法

光學(xué)顯微技術(shù)

根據(jù)光學(xué)原理不同，目前光學(xué)顯微鏡已發(fā)展成多種類(lèi)型，教學(xué)研究領(lǐng)域中常見(jiàn)的主要有以下幾種：

一．暗視野顯微鏡

暗視野顯微鏡又稱(chēng)超顯微鏡或限外顯微鏡。它是根據(jù)“丁達(dá)爾效應(yīng)”光學(xué)原理，設(shè)計(jì)出來(lái)的一種特殊顯微鏡，比普通光學(xué)顯微鏡的分辨率高50倍。它通過(guò)暗視野聚光器，把直射光照明變?yōu)樾鄙涔庹彰鳎�使通過(guò)樣品進(jìn)入物鏡成像的光只有衍射光。所以，整個(gè)觀(guān)察視野背景是黑暗的，而觀(guān)察的樣品在黑暗的背景反襯下顯示出清晰的衍射光結(jié)構(gòu)輪廓。

二．相差顯微鏡

相差顯微鏡能夠把相差變成振幅差，主要依賴(lài)于它的特殊結(jié)構(gòu)。首先用環(huán)狀光闌代替可變光闌，環(huán)狀光闌是由大小不同的環(huán)狀孔形成的光闌，它們的直徑和孔寬是與不同的物鏡相匹配的，其作用是將直射光所成的像從一些衍射旁緣分出來(lái)。其次是用帶相板的相差物鏡代替普通物鏡，相板分為共軛區(qū)和補(bǔ)償區(qū)，可選擇性地鍍上吸收光線(xiàn)的吸收膜和推遲相位的相位膜，從而使相板具有既能推遲直射光線(xiàn)或衍射光的相位，又有吸收光調(diào)整亮度、突出疊加效果的作用。

三．熒光顯微鏡

熒光顯微鏡是能夠利用細(xì)胞內(nèi)某些化學(xué)成分或細(xì)胞經(jīng)特殊染色后，受到特定波長(zhǎng)的光激發(fā)后，產(chǎn)生特征性波長(zhǎng)的熒光，來(lái)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)某些化學(xué)組成的一種儀器。熒光顯微鏡是依靠一個(gè)高發(fā)光效率的點(diǎn)光源（高壓汞燈），釋放出含有較多數(shù)量的紫外光和藍(lán)紫光的復(fù)合光，經(jīng)過(guò)濾色系統(tǒng)后，形成激發(fā)光，激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后，再通過(guò)物鏡和目鏡（石英玻璃制成）的放大進(jìn)行觀(guān)察。

應(yīng)用熒光顯微鏡具有三個(gè)優(yōu)點(diǎn)：

敏感性高：只要細(xì)胞內(nèi)某種物質(zhì)的含量達(dá)到10-16克就能檢測(cè)出來(lái)。特異性強(qiáng)：特定性質(zhì)的化學(xué)物質(zhì)，在一定激發(fā)光的激發(fā)下，產(chǎn)生熒光的光譜性質(zhì)不變。

測(cè)定快速：細(xì)胞受激發(fā)后，就可進(jìn)行觀(guān)察，5-10分鐘即可獲得對(duì)細(xì)胞的特定物質(zhì)進(jìn)行定性、定位研究的結(jié)果。

第二節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞工程與顯微技術(shù)操作

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

細(xì)胞培養(yǎng)是在無(wú)菌條件下，把動(dòng)、植物組織細(xì)胞（微生物細(xì)胞），自有機(jī)體分離出來(lái)放在玻璃器皿內(nèi)，加入人工配制的培養(yǎng)基，使細(xì)胞繼續(xù)生存和生長(zhǎng)，以直接觀(guān)察活細(xì)胞的形態(tài)、活動(dòng)、分化及發(fā)育過(guò)程的一種技術(shù)。

細(xì)胞培養(yǎng)的突出特點(diǎn)是在離體的條件下觀(guān)察和研究細(xì)胞生命活動(dòng)的規(guī)律。根據(jù)研究目的不同，可選用不同的培養(yǎng)方式。觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)變化，可用蓋片微室懸滴培養(yǎng)、平板培養(yǎng)或液體懸浮培養(yǎng)，后用倒置相差顯微鏡進(jìn)行活體觀(guān)察；檢查細(xì)胞繁殖速度，用細(xì)胞懸浮培養(yǎng)為宜。

動(dòng)物細(xì)胞一般接種于有培養(yǎng)液或半固體培養(yǎng)基的器皿中，于37℃，5％CO2，95％空氣，95％～100％濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。植物細(xì)胞或原生質(zhì)體則采用固體、懸滴、液體等多種培養(yǎng)方法，溫度為25～30℃，有時(shí)需光照，對(duì)液體培養(yǎng)需通風(fēng)。

細(xì)胞的生長(zhǎng)需要有充分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基和適宜的環(huán)境條件。培養(yǎng)基不僅要具備正常機(jī)體中可以從外環(huán)境中攝取的必需氨基酸，還要提供一些非必需氨基酸、多種維生素，這是細(xì)胞代謝過(guò)程中必不可少的成分，而離體的動(dòng)植物細(xì)胞、原生質(zhì)體自身不能合成；培養(yǎng)基中還需含Ca2+、Mg2+等無(wú)機(jī)離子與緩沖成分，以組成一定離子強(qiáng)度和穩(wěn)定pH（pH7.27.4）的細(xì)胞生長(zhǎng)條件；還應(yīng)提供適量的葡萄糖，以維持細(xì)胞代謝及產(chǎn)能；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，尚需加入適量的血清，而植物細(xì)胞及原生質(zhì)體培養(yǎng)時(shí)，需加入生長(zhǎng)素、激動(dòng)素等植物激素。

目前常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)類(lèi)型主要有：原核生物培養(yǎng)，，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物細(xì)胞培養(yǎng)。

一．原生物細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)菌細(xì)胞培養(yǎng)簡(jiǎn)便，生長(zhǎng)繁殖快，不僅能直接利用細(xì)菌本身進(jìn)行污水處理等工業(yè)化生產(chǎn)，而且目前的生物工程技術(shù)中，利用細(xì)菌表達(dá)一些人工構(gòu)建的基因產(chǎn)物也成了現(xiàn)實(shí)，細(xì)菌細(xì)胞在基因工程研究中發(fā)揮著越來(lái)越重大的作用。細(xì)菌的培養(yǎng)關(guān)鍵是防止其它菌的污染，它可在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)也可在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。

二．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可分為原代細(xì)胞與傳代細(xì)胞。原代細(xì)胞是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。適應(yīng)在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞稱(chēng)為傳代細(xì)胞。

三．植物細(xì)胞培養(yǎng)

植物細(xì)胞培養(yǎng)主要有單倍體細(xì)胞培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)。單倍體細(xì)胞培養(yǎng)主要用花藥在人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)�？梢詮男℃咦樱ㄐ坌陨�殖細(xì)胞）直接發(fā)育成胚狀體，然后長(zhǎng)成單倍體植株；或者通過(guò)愈傷組織誘導(dǎo)分化出芽和根，最終長(zhǎng)成植株。單倍體細(xì)胞培養(yǎng)已在植物育種中取得了很大成就。

總結(jié)：

對(duì)本章部分內(nèi)容做過(guò)總結(jié)以后，更有利于我對(duì)其知識(shí)點(diǎn)

的掌握，對(duì)我以后的學(xué)習(xí)也有很大的幫助。因此，也希望自己在以后的學(xué)習(xí)過(guò)程中能養(yǎng)成一種善于總結(jié)的良好習(xí)慣。

擴(kuò)展閱讀：4細(xì)胞生物學(xué)研究方法答案

第二章細(xì)胞生物學(xué)研究方法

一、名詞解釋

1、resolution：分辨力是指顯微鏡或人眼在25cm的明視距離處，能清楚地分辨被檢物體細(xì)微結(jié)構(gòu)最小距離的能力。能夠區(qū)分的兩點(diǎn)間的距離越小，表示分辨力越高。

2、顯微結(jié)構(gòu)：通過(guò)光學(xué)顯微鏡所觀(guān)察到的樣品的各種結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞的大小、外部形態(tài)以及細(xì)胞核、線(xiàn)粒體、高爾基復(fù)合體、中心體等內(nèi)部構(gòu)成都屬于顯微結(jié)構(gòu)。

3、超微結(jié)構(gòu)：也稱(chēng)亞顯微結(jié)構(gòu)。指在電子顯微鏡下所觀(guān)察到的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞核、線(xiàn)粒體、高爾基復(fù)合體、中心體、核糖體、微管、微絲等細(xì)胞器的微細(xì)結(jié)構(gòu)。

4、細(xì)胞培養(yǎng)：指活細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù)，即在無(wú)菌條件下，從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞、模擬機(jī)體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長(zhǎng)和繁殖的方法。

5、原代培養(yǎng)：指從機(jī)體組織中取材后接種到培養(yǎng)基中所進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)，即直接取材于機(jī)體的細(xì)胞培養(yǎng)。所形成的細(xì)胞稱(chēng)原代細(xì)胞，它是在體外培養(yǎng)任何一種體細(xì)胞所必須經(jīng)歷的階段和傳代培養(yǎng)的基礎(chǔ)。

6、傳代培養(yǎng)：指當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中生長(zhǎng)、增殖到一定密度后，一分為二或以其他比例分裝或轉(zhuǎn)移到2個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中所進(jìn)行的再培養(yǎng)。

7、細(xì)胞融合：又稱(chēng)為細(xì)胞雜交，指細(xì)胞彼此接觸時(shí)，2個(gè)或2個(gè)以上的細(xì)胞合并成為一個(gè)細(xì)胞的現(xiàn)象。8、cellline：原代培養(yǎng)首次傳代成功后，則稱(chēng)之為細(xì)胞系。如細(xì)胞系的生存期有限，則稱(chēng)之為有限細(xì)胞系；已獲無(wú)限繁殖能力，能持續(xù)生存的細(xì)胞系，則稱(chēng)為連續(xù)細(xì)胞系或無(wú)限細(xì)胞系。二、選擇題【A1型題】

1、A；2、B；3、B；4、A；5、C；6、D；7、A；8、D；9、C；10、D；11、C；12、A；13、A；14、B；15、C；16、A；17、E；18、A；19、C；20、D；21、C；22、E；23、A；24、D；25、B；26、E【A2型題】

1、E；2、D；3、C；4、D；5、A；6、B；7、C；8、D；9、D；10、A【X型題】

1、ACE；2、CDE；3、AE；4、CE；5、ABCD；6、ABC；7、ABCED；8、ACD；9、ABCD三、填空題

1、普通顯微鏡相差顯微鏡暗視野顯微鏡熒光顯微鏡2、照明系統(tǒng)光學(xué)放大系統(tǒng)機(jī)械裝置系統(tǒng)

3、電子照明系統(tǒng)電磁透鏡成像系統(tǒng)真空系統(tǒng)記錄系統(tǒng)電源系統(tǒng)4、物鏡和照明系統(tǒng)的位置顛倒

5、掃描電子顯微鏡透射電子顯微鏡6、0.1μm0.1mm3nm

7、差速離心法密度梯度離心法

8、0.2μmR=0.61λ／N.A.N.A.=nsinα／2

9、細(xì)胞化學(xué)法熒光細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光鏡檢術(shù)放射自顯影技術(shù)細(xì)胞顯微分光光度測(cè)定技術(shù)流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)細(xì)胞組分的分級(jí)分離法10、冰凍蝕刻

11、原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)

12、單層生長(zhǎng)形態(tài)變成多態(tài)性具有接觸抑制現(xiàn)象13、體外環(huán)境不能與體內(nèi)的條件完全等同四、判斷題

1、√；2、×；3、√；4、×；5、√；6、×；7、√；8、√；9、√；10、×；11、√；12、×；13、×；14、×五、簡(jiǎn)答題

1、光學(xué)顯微鏡上調(diào)節(jié)光線(xiàn)強(qiáng)弱的裝置有反光鏡、聚光鏡和光闌。

（1）反光鏡：反光鏡是安裝在鏡臺(tái)下面、鏡柱前方的面可轉(zhuǎn)動(dòng)的圓鏡。用來(lái)調(diào)節(jié)光線(xiàn)，能將來(lái)自不同方向的光線(xiàn)收集起來(lái)反射到聚光鏡中。

（2）聚光鏡：聚光鏡是位于鏡臺(tái)下方的組透鏡，用以匯集光線(xiàn)使其成束，增強(qiáng)照明度和視野的亮度。

（3）光闌：光闌是位于聚光鏡底部的一個(gè)圓環(huán)狀結(jié)構(gòu)，裝有多片半月形的薄金屬片，疊合在中央形成弧形孔。圓環(huán)外源的突起小柄可調(diào)節(jié)金屬片的分開(kāi)或合攏，作用是調(diào)節(jié)光線(xiàn)強(qiáng)弱，使物像變得清晰。2、電鏡和光鏡從光源、透鏡、成像和分辨力四方面不同。

（1）光源的不同：光學(xué)顯微鏡利用可見(jiàn)光作為光源，照明部分包括反光鏡、聚光鏡和光闌，可對(duì)入射光線(xiàn)進(jìn)行集光并調(diào)節(jié)其強(qiáng)弱。電鏡是以電子束代替光源，以一根鎢絲作為陰極發(fā)射電子，電子受到陽(yáng)極吸引而加快速度，加速的電子通過(guò)陽(yáng)極的微孔形成電子束，構(gòu)成照明源。

（2）透鏡的不同：光學(xué)顯微鏡的透鏡由物鏡、目鏡組成，每種鏡頭由2～3個(gè)玻璃透鏡構(gòu)成，由于可見(jiàn)光能在空氣中直線(xiàn)前進(jìn)，所以玻璃透鏡可直接在空氣中工作。電子顯微鏡使用產(chǎn)生軸對(duì)稱(chēng)磁場(chǎng)的精密線(xiàn)圈作為電磁透鏡，以電磁場(chǎng)透鏡代替玻璃透鏡，但因?yàn)殡娮幼矒艨諝夥肿訉�發(fā)生散射而不能直線(xiàn)前進(jìn)，所以，鏡筒中的空氣必須抽出，保持高度真空。

（3）成像的不同：光學(xué)顯微鏡是通過(guò)物鏡和目鏡的組玻璃透鏡將標(biāo)本上的微小物體放大成像。在電子顯微鏡下，標(biāo)本通過(guò)一個(gè)氣閘送入真空鏡筒，經(jīng)聚光鏡匯聚的平行電子束被物鏡、中間鏡和投影鏡多級(jí)放大，最后在熒光屏上成像即時(shí)觀(guān)察，或投射到照相底片上成像使底片感光作為永久記錄。（4）分辨力不同：光學(xué)顯微鏡分辨力可達(dá)200nm（油鏡），電子顯微鏡分辨力為0.1nm。

3、如果含有很多的其他分子，會(huì)與電子發(fā)生碰撞，使電子散射，引起眩光，影響成像質(zhì)量；碰撞也會(huì)使電子束不穩(wěn)定，產(chǎn)生閃爍現(xiàn)象；灼熱的燈絲遇氣體也易腐蝕和斷裂。

4、因?yàn)殡婄R是電子成像。肉眼無(wú)法觀(guān)察帶有“樣品信息”的電子束。所以要有記錄系統(tǒng)來(lái)記錄成像結(jié)果。5、照明方式通常為落射式，即光源通過(guò)物鏡投射于樣品上；光源為紫外光，波長(zhǎng)較短，分辨力高于普通顯微鏡；有兩個(gè)特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見(jiàn)光，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線(xiàn)，用以保護(hù)人的眼睛。

6、冰凍蝕刻技術(shù)亦稱(chēng)冰凍斷裂。標(biāo)本置于干冰或液氮中，進(jìn)行冰凍。然后用冷刀驟然將標(biāo)本斷開(kāi)，升溫后，冰在真空條件下迅即升華，暴露出了斷裂面的結(jié)構(gòu)。冰升華暴露出標(biāo)本內(nèi)部結(jié)構(gòu)的步驟稱(chēng)為蝕刻。蝕刻后，再向斷裂面上噴涂一層蒸氣碳和鉑。然后將組織溶掉，把金屬薄膜剝下來(lái)，此膜即為復(fù)膜。復(fù)膜顯示出了標(biāo)本蝕刻畫(huà)的形態(tài)，可置于電鏡下觀(guān)察。電鏡下的影像即代表標(biāo)本中細(xì)胞斷裂面處的結(jié)構(gòu)。

7、高等生物是由多細(xì)胞構(gòu)成的整體，在整體條件下要研究單個(gè)細(xì)胞或某一群細(xì)胞在體內(nèi)的功能活動(dòng)是十分困難的。但是如果把活細(xì)胞拿到體外培養(yǎng)進(jìn)行觀(guān)察和研究，則要方便得多，培養(yǎng)中的細(xì)胞不受體內(nèi)復(fù)雜環(huán)境的影響，人為改變培養(yǎng)條件（如物理、化學(xué)、生物等外界因素的變化）即可進(jìn)一步觀(guān)察細(xì)胞在單因素或多因素影響下的生理功能變化�；罴�(xì)胞離體后要在一定的生理?xiàng)l件下才能存活和進(jìn)行生理活動(dòng)，特別是高等動(dòng)植物細(xì)胞要求的生存條件極其嚴(yán)格，稍有不適就要死亡。所以，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)就是選用最佳生存條件對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和研究的最基本技術(shù)之一。

8、體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的一般過(guò)程是：①準(zhǔn)備工作，包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。②取材：在無(wú)菌環(huán)境／從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞，經(jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接人培養(yǎng)器血中，這一過(guò)程稱(chēng)為取材。如果是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)，則無(wú)取材這一過(guò)程。③培養(yǎng)：將取得的組織細(xì)胞接人培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過(guò)程稱(chēng)為培養(yǎng)。如進(jìn)行組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如進(jìn)行分散細(xì)胞的培養(yǎng)，一般應(yīng)在接種于培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接種于培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞種于培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長(zhǎng)狀態(tài)。9、體外培養(yǎng)細(xì)胞必須注意三個(gè)環(huán)節(jié)：物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)、生存環(huán)境和廢物的排除。

體外培養(yǎng)細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)是由培養(yǎng)基提供的。培養(yǎng)基通常含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的氨基酸、維生素和微量元素。一般培養(yǎng)細(xì)胞所用的培養(yǎng)基是合成培養(yǎng)基，它含有細(xì)胞生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)成分：但是在使用合成培養(yǎng)基時(shí)需要添加一些天然成分，其中最重要的是血清，以牛血清為主。這是因?yàn)檠�清中含有多種促細(xì)胞生長(zhǎng)因子和一些生物活性物質(zhì)。

由于血清中含有一些不明成分，對(duì)于特殊目的細(xì)胞培養(yǎng)是不利的。為此，研究人員正在探索無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞的條件，并已經(jīng)取得一些進(jìn)展。由于機(jī)體內(nèi)的細(xì)胞生長(zhǎng)通常需要不同的細(xì)胞因子進(jìn)行調(diào)節(jié)，所以，在無(wú)血清培養(yǎng)時(shí)仍然需要添加必要的因子，包括促細(xì)胞生長(zhǎng)因子（如EGF），促貼附物（如層黏連蛋白）和其他活性物質(zhì)（如轉(zhuǎn)鐵蛋白）。無(wú)血清培養(yǎng)排除了有血清培養(yǎng)時(shí)血清中不明因素的干擾，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加可靠。

體外細(xì)胞培養(yǎng)必須模擬體內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境。環(huán)境因素主要是指無(wú)菌環(huán)境、合適的溫度、一定的滲透壓和氣體環(huán)境。氣體主要有兩種，即O2和CO2。后者對(duì)于維持細(xì)胞培養(yǎng)液的酸堿度十分重要。

活體內(nèi)生長(zhǎng)的細(xì)胞所產(chǎn)生的代謝物和廢物通過(guò)一定的系統(tǒng)進(jìn)行利用和排除。體外培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生的代謝物和廢物積累在培養(yǎng)液中，所以定期更換培養(yǎng)液，對(duì)于體外細(xì)胞培養(yǎng)也是至關(guān)重要的。六、問(wèn)答題

1、分辨力表示的是能夠區(qū)別兩個(gè)點(diǎn)間最近距離的能力，所以廣值越小，分辨力越高。從分辨力的表達(dá)式來(lái)看，NA越大，分辨力越高，或者波長(zhǎng)越短，分辨力越高。

當(dāng)以可見(jiàn)光作光源，玻璃透鏡的最大分辨力是多少呢？應(yīng)從以下幾個(gè)方面來(lái)考慮這一問(wèn)題。首先應(yīng)如何盡可能地縮短波長(zhǎng)。可見(jiàn)光的波長(zhǎng)范圍是400～700nm，而可見(jiàn)光中的藍(lán)色光波長(zhǎng)最短，為450nm，所以光鏡使用時(shí)應(yīng)濾去其他雜色光。第二是使NA的數(shù)值盡可能大，因?yàn)樽詈玫牟Ａ�透鏡的鏡口角是70°，所以sinα的最大值為0.94，空氣的折光率（n）為1，因此玻璃透鏡的最大數(shù)值孔徑為0.94。這樣，我們可以計(jì)算光鏡的最大分辨力了：假定用最好的玻璃透鏡，角孔徑為70°，用最短的可見(jiàn)光藍(lán)色光的波長(zhǎng)為450nm，用空氣作為光的折射介質(zhì)，則最大分辨力為R=0.61λ／N.A.=0.61×450／0.94=292nm。

光鏡中的油鏡可用油作為光折射的介質(zhì)，由于油的折光率為1.5，所以用油鏡時(shí)，分辨力R=0.61λ／N.A.=0.61×450／1.5×0.94=196nm=0.2μm

在光學(xué)顯微鏡中，用紫外光作光源可使分辨率提高到0.1μm。紫外光的波長(zhǎng)較短，約為200～300nm。但是，紫外光是肉眼不可見(jiàn)的，必須通過(guò)照相。另外，用紫外光源時(shí)需用石英透鏡，價(jià)格較高。

2、基本原理：動(dòng)物高度分化的細(xì)胞核具有全套的個(gè)體遺傳信息，保持著全能性，有發(fā)育為完整個(gè)體的潛在能力。

基本步驟：

（1）取出一只成年母羊的乳腺上皮細(xì)胞，在低血清濃度下進(jìn)行體外培養(yǎng)。（2）取出卵細(xì)胞供體母羊的卵母細(xì)胞進(jìn)行去核處理。

（3）利用電融合技術(shù)使乳腺上皮細(xì)胞與去核卵母細(xì)胞進(jìn)行電融合。（4）將融合細(xì)胞在體外培養(yǎng)至囊胚期。

（5）將囊胚移植到母羊的子宮內(nèi)，使其著床和發(fā)育，直至生出小羊。主要技術(shù)：細(xì)胞培養(yǎng)；細(xì)胞融合；胚胎培養(yǎng)和胚胎移植。

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