201*年第一次全國臨床微生物室間質(zhì)評活動總結(jié)

201*年第一次全國臨床微生物實驗室間質(zhì)評回報總結(jié)

201*年第一次全國臨床微生物室間質(zhì)評活動總結(jié)

201*年第一次全國臨床微生物室間質(zhì)評活動共有885個單位參加，有852個實驗室按照規(guī)定時間結(jié)果報告,現(xiàn)對按時上報結(jié)果進行總結(jié)。

菌號

100110021003100410051005-1

表1.分離鑒定結(jié)果統(tǒng)計正確結(jié)果正確實驗室數(shù)目正確百分率（%）未檢出致病菌(20分)1201*.2金黃色葡萄球菌（不扣分）71384.3小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(20分)83398.1耶爾森菌屬內(nèi)其他種(非高致病菌)(10分)50.6杜克雷嗜血桿菌(20分)72084.9嗜血桿菌屬及屬內(nèi)其他種（10分）141.6坂崎腸桿菌(20分)83998.9陰溝腸桿菌（10分）30.4嗜水氣單胞菌(10分)83398.2氣單胞菌屬內(nèi)其他菌（5分）60.7化膿性鏈球菌或A群鏈球菌(10分)78198.0β-溶血鏈球菌其他血清群(5分)50.6鏈球菌屬及草綠色鏈球菌群(5分)81.0

表2.1004號坂崎腸桿菌藥敏結(jié)果統(tǒng)計抗生素名稱慶大霉素頭孢他啶頭孢曲松頭孢噻肟頭孢吡肟亞胺培南

序號12參考結(jié)果MIC(g/ml)0.1250.1250.1250.094抑菌環(huán)直徑(mm)25323131敏感度SSSSSSS各實驗室結(jié)果分布I140210R12021134751732367579758777表3.1005號嗜水氣單胞菌藥敏結(jié)果統(tǒng)計序號567

1

衛(wèi)生部臨床檢驗中心微生物室201*.4.22

抗生素名稱頭孢吡肟/頭孢曲松復方新諾明左氧氟沙星環(huán)丙沙星參考結(jié)果MIC(g/ml)0.1250.0940.0030.004抑菌環(huán)直徑(mm)34294040敏感度SSSSSS各實驗室結(jié)果分布I33702R1013107253396496256201*年第一次全國臨床微生物實驗室間質(zhì)評回報總結(jié)

表4.1005-1號A群鏈球菌（化膿鏈球菌）藥敏結(jié)果統(tǒng)計序號8910

抗生素名稱青霉素G/氨芐西林紅霉素/克林霉素萬古霉素參考結(jié)果MIC(g/ml)0.0080.0160.0230.0320.5抑菌環(huán)直徑(mm)3840312824敏感度SSSSSS各實驗室結(jié)果分布I21691R951562663401684668733鑒定結(jié)果分析

1001號咽試子標本咽部腫痛青年患者，分離出金黃色葡萄球菌和副流感嗜血桿菌。有84.3%（713/846）實驗室報告金黃色葡萄球菌，9個實驗室報告嗜血桿菌。

多數(shù)咽部感染患者都是由于呼吸道病毒引起，由細菌引起感染占5-40%。A群β-溶血鏈球菌（化膿鏈球菌）是引起咽峽炎最常見的致病菌。其他C群和G群β-溶血鏈球菌也可以經(jīng)食源性引起咽峽炎爆發(fā)，但不像A群鏈球菌那樣引起嚴重的免疫系統(tǒng)疾病。

肺炎鏈球菌和嗜血桿菌屬有時可在咽部標本中分離到，但這些菌不大可能是引起普通咽峽炎的病原菌，如副流感嗜血桿菌。嗜血桿菌定植在健康人的上呼吸道，在咽部標本培養(yǎng)分離到時，實驗室不應常規(guī)報告嗜血桿菌，這樣會引起混淆和導致臨床醫(yī)生不必要的治療。

咽試子細菌培養(yǎng)常規(guī)只檢測化膿鏈球菌，除非醫(yī)生特殊需要，如在診斷白喉時。溶血隱秘桿菌（Arcanobacteriumhaemolyticum）也可引起咽炎和扁桃體化膿。

b型流感嗜血桿菌和偶爾由金黃色葡萄球菌或肺炎鏈球菌引起的會厭軟骨炎可迅速發(fā)展為蜂窩織炎，可造成氣道阻塞。咽試子培養(yǎng)對確定此類感染的病原菌有意義。

1004號標本應報告“未檢出致病菌”。只有122個實驗室正確報告。金黃色葡萄球菌在下呼吸道感染中有臨床意義，因標本操作和報告流程尚未統(tǒng)一，這次咽試子培養(yǎng)報告“金黃色葡萄球菌”不扣分。

1002號腹瀉患者便標本培養(yǎng)分離出小腸結(jié)腸炎耶爾森菌和大腸埃希菌，報告有臨床意義的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌，有5個實驗室種鑒定錯誤，報告耶爾森菌屬內(nèi)其他種(非高致病菌)。

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1003號陰莖潰瘍試子標本分離出杜克雷嗜血桿菌（Haemophilusducreyi）和表皮葡萄球菌，后者是皮膚污染菌。84.9%（720/848）實驗室正確分離、鑒定和報告杜克雷嗜血桿菌，有14個實驗室報告其他嗜血桿菌，5個實驗室報告淋病奈瑟菌，87個實驗室報告表皮葡萄球菌，10個實驗室報告其他葡萄球菌，21個實驗室報告“未檢出致病菌”。

淋病奈瑟菌、沙眼衣原體和杜克雷嗜血桿菌肯定是生殖系統(tǒng)的致病菌，而腸桿菌科、金黃色葡萄球菌和B群鏈球菌只在某些臨床情況下作為致病菌（條件致病菌）。

杜克雷嗜血桿菌是革蘭陰性小桿菌，引起性傳播疾病外生殖器軟下疳。杜克雷嗜血桿菌分離條件：5%CO2氣體培養(yǎng)，最適生長溫度33℃培養(yǎng)3-4天，血平板上可生長，巧克力平板生長更好。與其他嗜血桿菌區(qū)別：生長需X因子，不需要V因子，其他嗜血桿菌生長需要V因子，不需X因子，流感嗜血桿菌和埃及嗜血桿菌生長需要X+V因子；不溶血與溶血嗜血桿菌區(qū)別；杜克雷嗜血桿菌氧化酶陽性，觸酶陰性，吲哚陰性，SPS敏感，堿性磷酸酶陽性；而陰道加德納菌是氧化酶陰性，觸酶陰性。此外，標本來源也作為判斷報告杜克雷嗜血桿菌的重要依據(jù)。

很多實驗室培養(yǎng)分離不到杜克雷嗜血桿菌，可能與培養(yǎng)基質(zhì)量、培養(yǎng)溫度及培養(yǎng)環(huán)境氣體等因素有關(guān)。

1004號嬰兒菌血癥標本，血培養(yǎng)陽性，生長坂崎腸桿菌（Enterobactersakazakii）。98.9%（839/848）實驗室正確分離和鑒定。

臨床意義：坂崎腸桿菌是條件致病菌，食源性傳播，引起新生兒腦膜炎、壞死性小腸結(jié)腸炎、敗血癥、腦膿腫、腦梗塞等散發(fā)和爆發(fā)病例，特別是早產(chǎn)兒，免疫系統(tǒng)弱的新生兒，新生兒死亡率為40-80%。

坂崎腸桿菌對常規(guī)滅菌方法耐受，如不易穿透、耐熱、耐干燥壓力。在嬰兒配方奶粉中可長期存活，還可在4℃冷藏冰箱中繁殖；可形成生物膜(biofilms)可抵御消毒劑(CatherineJ.Hunter.Enterobactersakazakii:AnEmergingPathogeninInfants

andNeonates.SurgInfect(Larchmt).201*October;9(5):533539.)。

坂崎腸桿菌生化反應與陰溝腸桿菌非常相似，可通過菌落產(chǎn)黃色區(qū)分。

1005號標本傷口試子，分離出化膿鏈球菌和嗜血氣單胞菌，這兩種菌都是引起傷口感染的病原菌。

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氣單胞菌屬有14個種，只有豚鼠氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、簡氏氣單胞菌(A.

jandaei）、舒氏氣單胞菌(A.schubertii)和維氏氣單胞菌(A.veronii)五種目前認為可引

起人類各種感染，包括：胃腸炎、蜂窩織炎和菌血癥。還有溶血尿毒癥、燒傷相關(guān)敗血癥和各種呼吸道感染，包括會厭軟骨炎。臨床標本中有3種菌呈分離優(yōu)勢菌：嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌和維氏氣單胞溫和生物型(A.veroniibiotypesobria)。嗜水氣單胞菌V-P試驗和賴氨酸脫氫酶陽性，水解七葉苷陽性可與豚鼠氣單胞菌和其他氣單胞菌區(qū)別。

化膿鏈球菌正確分離和鑒定實驗室占上報實驗室的92.5%(788/852),有些分離到的實驗室鑒定為無乳鏈球菌或不能血清分群，還有實驗室報告草綠色鏈球菌群。首先血平板的質(zhì)量影響到化膿鏈球菌的生長，羊血質(zhì)量關(guān)系到是否產(chǎn)生透明溶血環(huán)，確定是β-溶血鏈球菌后，用桿菌肽紙片敏感判斷是化膿鏈球菌，還可用β-溶血鏈球菌分型血清確認，CAMP試驗陽性是無乳鏈球菌，鑒別并不困難。血平板所用羊血如果貧血，則看不到典型的透明溶血環(huán)，可能是草綠色溶血，就會導致錯誤的判斷。糾正措施：應該用肺炎鏈球菌和化膿鏈球菌做每批次的血平板質(zhì)控，如果能生長并有典型菌落和溶血性，血平板才合格，可用于接種臨床標本。

藥敏評價

1004號標本坂崎腸桿菌典型的坂崎腸桿菌治療用氨芐西林和慶大霉素。為了防止可能的坂崎腸桿菌耐藥性增加，醫(yī)生也會考慮用卡巴配能類和頭孢吡肟與氨基糖苷類聯(lián)合治療，但標準推薦最小使用廣譜抗生素原則，還是要依據(jù)培養(yǎng)和藥敏結(jié)果用藥。研究者通過對各種坂崎腸桿菌株的抗菌譜調(diào)查，發(fā)現(xiàn)野生群坂崎腸桿菌株沒有對頭孢菌素天然耐藥，并且這些菌株缺少β-內(nèi)酰胺酶。象其他腸桿菌科菌株一樣，坂崎腸桿菌對林可霉素類,糖肽類、鏈陽霉素(streptogramins)、梭鏈孢酸(fusidicacids)天然耐藥。

因此，這株菌是典型的敏感菌株。很多使用專家系統(tǒng)的實驗室依據(jù)系統(tǒng)對氨芐西林、第一、二代頭孢菌素敏感結(jié)果進行了修正，可能是依據(jù)通常腸桿菌屬細菌的耐藥譜特征。這次活動對氨芐西林、第一、二代頭孢菌素結(jié)果不計分。

1005號混合感染標本嗜水氣單胞菌，依據(jù)CLSI“不常見和苛養(yǎng)菌藥敏標準(M45-A)”,初級試驗和報告：阿莫西林/棒酸，氟喹諾酮類、復方新諾明、第三、四

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代頭孢菌素。嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌和維氏氣單胞溫和生物型是臨床標本中最常分離的氣單胞菌，大多數(shù)文獻的藥敏試驗都是局限在這3種菌。鄰單胞菌屬只有一個種：類志賀鄰單胞菌，藥敏結(jié)果解釋原來是歸在腸桿菌科，因其表型與氣單胞菌屬相似，致病譜也相似，因此藥敏折點判斷歸在氣單胞菌指南。腸道外分離的氣單胞菌需要做藥敏試驗。氣單胞菌藥敏解釋標準見附表。

1005-1號標本化膿鏈球菌藥敏結(jié)果解釋在CLSI需氧菌藥敏折點判斷標準中(M100-S20)的β-溶血鏈球菌群，藥敏用5%羊血MH平板，質(zhì)控菌株為ATCC49619肺炎鏈球菌。青霉素或氨芐西林、頭孢吡肟或頭孢噻肟或頭孢曲松、萬古霉素有紙片擴散法和MIC法折點標準，厄他培南、美羅培南、達普托霉素只有MIC法折點標準，因尚未發(fā)現(xiàn)或極少出現(xiàn)對這些抗生素耐藥的β-溶血鏈球菌，因此只有敏感判斷折點。注意：

1.紙片法檢測肉眼觀察完全抑制的抑菌環(huán)，沒有明顯可見的受試菌生長的邊緣為抑菌環(huán)端點。用反射光讀取抑菌環(huán)結(jié)果，光源在平皿上方。若用放大鏡觀察抑菌環(huán)，忽略邊緣生長非常微弱的菌落。

2.CLSI/M100-S20文件中β-溶血鏈球菌群包括大菌落的A群（化膿鏈球菌）、C群、G群和B群（無乳鏈球菌），小菌落β-溶血鏈球菌的A群、C群、F群或G群抗原（咽峽炎鏈球菌群，之前也稱米勒鏈球菌,即S.milleri）被放到草綠色鏈球菌群，藥敏結(jié)果解釋用草綠色鏈球菌群判定折點。

3.化膿鏈球菌和無乳鏈球菌無需向臨床常規(guī)報告青霉素和其他β-內(nèi)酰胺類抗生素藥敏結(jié)果，如果發(fā)現(xiàn)不敏感菌株，應送往參考實驗室。

附件：201*年CLSI需氧菌藥敏主要變更內(nèi)容（稍后可在網(wǎng)上下載）

提示：201*年全國微生物質(zhì)評大會擬9月中旬在杭州召開，屆時正式通知請關(guān)注

Clinet網(wǎng)。

衛(wèi)生部臨床檢驗中心微生物實驗室

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衛(wèi)生部臨床檢驗中心微生物室201*.4.

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201*年第一次全國臨床微生物室間質(zhì)評活動總結(jié)

201*年第一次全國臨床微生物室間質(zhì)評活動共有746個單位參加，有706個實驗室寄回結(jié)果報告,40個實驗室未回報結(jié)果。

表1.分離鑒定結(jié)果統(tǒng)計

菌號

正確結(jié)果

正確實驗室數(shù)目正確百分率（%）

67696875631567718659459813

97.41.198.30.690.10.796.22.5

96.5

0.690.32.1

07-01白色假絲酵母菌（20分）

假絲酵母菌屬或?qū)賰?nèi)其他種（10分）其它結(jié)果(0分)

07-02腦膜炎奈瑟菌（20分）

奈瑟菌屬或?qū)賰?nèi)其他種（10分）其它結(jié)果(0分)

07-03類志賀鄰單胞菌（20分）

鄰單胞菌屬（10分）其它結(jié)果(0分)

07-04肺炎克雷伯菌（20分）

克雷伯菌屬或?qū)賰?nèi)其他種（10分）其它結(jié)果(0分)

07-05卡他布蘭漢菌（10分）

布蘭漢菌屬某種（5分）其它結(jié)果(0分)

07051流感嗜血桿菌（10分）

嗜血桿菌屬或?qū)賰?nèi)其他種（5分）其它結(jié)果(0分)

表2.0704號肺炎克雷伯菌(ESBLase+)藥敏結(jié)果統(tǒng)計序號1抗生素名稱氨芐西林阿莫西林阿莫西林/棒酸氨芐西林/舒巴坦頭孢唑林頭孢噻吩頭孢呋辛頭孢噻肟頭孢曲松頭孢他啶頭孢他啶/棒酸頭孢噻肟/棒酸

參考結(jié)果MIC(g/ml)抑菌環(huán)直徑(mm)668666961822191

各實驗室結(jié)果分布敏感度RRRRRRRRRRS157418I52249R53113626130448912242552520259623644頭孢吡肟氨曲南亞胺配南美羅配南復方新諾明呋喃妥因環(huán)丙沙星左氧氟沙星氧氟沙星諾氟沙星慶大霉素丁胺卡那160.25>256141325613666666RRSSRRRRRRRR184627234910132121211611116422523465535974175243911061205715325678表3β－內(nèi)酰胺酶結(jié)果

0705卡他布蘭漢菌9β－內(nèi)酰胺酶氨芐西林阿莫西林參考結(jié)果陽性RR07051流感嗜血桿菌10β－內(nèi)酰胺酶氨芐西林阿莫西林參考結(jié)果陰性SS正確實驗室數(shù)目43542678正確率（％）81.990.680.4正確實驗室數(shù)目5119935正確率（％）94.176.270.007051流感嗜血桿菌藥敏結(jié)果統(tǒng)計

序號11抗生素名稱頭孢噻肟頭孢他啶頭孢曲松阿莫西林/棒酸頭孢克羅美羅培南亞胺培南頭孢呋辛阿奇霉素紅霉素1213參考結(jié)果抑菌環(huán)直徑MIC(mm)(g/ml)0.125340.0163822714環(huán)丙沙星左氧氟沙星氧氟沙星復方新諾明四環(huán)素

0.030.125283422SSSSS3643051064773421410941472315鑒定結(jié)果評價

0701號標本是混合標本，根據(jù)臨床癥狀，報告白色假絲酵母菌或白色念珠菌，霉菌性陰道炎，表皮葡萄球菌和腸球菌在此無特別的臨床意義。有些實驗室不能正確區(qū)分白色念珠菌和其他念珠菌，白色念珠菌因不能還原TCC，因此，在沙包弱培養(yǎng)基上顯示白色菌落，并且在玉米吐溫培養(yǎng)基上產(chǎn)生厚壁孢子，可與其他念珠菌區(qū)別。此外，霉菌性陰道炎通常由白色念珠菌引起。

0702號標本是單一菌，腦膜炎奈瑟菌，體外培養(yǎng)對營養(yǎng)要求較高，需在含有血清、血液等培養(yǎng)基中才能生長，常用巧克力培養(yǎng)基。最適溫度為37℃；專性需氧，初次分離培養(yǎng)須提供5%～10%CO2，在巧克力培養(yǎng)基上經(jīng)24h孵育后，形成圓形、凸起、光滑、透明似露滴狀的菌落。因能產(chǎn)生自溶酶，超過48h常死亡。觸酶和氧化酶陽性，分解葡萄糖和麥芽糖，不分解乳糖和蔗糖。此菌如果侵犯腦脊髓膜，可引起流行性腦脊髓膜炎，病人有劇烈頭痛、噴射性嘔吐、頸項強直等腦膜刺激癥狀，若搶救不及時可危及生命�；颊吣X脊液涂片可在中性粒細胞內(nèi)找到革蘭陰性雙球菌。

0703號標本有臨床意義的病原菌是類志賀鄰單胞菌，還有腸道正常菌群陰溝腸桿菌。類志賀鄰單胞菌屬于弧菌科鄰單胞菌屬，只有類志賀鄰單胞菌一個種。血平板上不溶血，菌落發(fā)灰色；氧化酶陽性可與腸桿菌科細菌區(qū)別（如沙門菌屬和志賀菌屬），發(fā)酵葡萄糖可與非發(fā)酵菌區(qū)別�；【鷮偻ǔＴ诟啕}中生長，而氣單胞菌屬和鄰單胞菌屬不生長；類志賀鄰單胞菌賴氨酸和鳥氨酸脫羧酶陽性，水解精氨酸可與氣單胞菌屬的菌相區(qū)別。

0704號標本是單一菌，肺炎克雷伯菌，部分實驗室報告為克雷伯菌屬內(nèi)其他菌，鑒別反應不困難，產(chǎn)酸克雷伯菌和解鳥氨酸克雷伯菌靛基質(zhì)反應陽性，而肺炎克雷伯菌靛基質(zhì)陰性；其他克雷伯菌則甲基紅陽性，而肺炎克雷伯菌陰性。

0705號標本是混合菌，有臨床意義的是卡他布蘭漢菌和流感嗜血桿菌，甲型鏈球菌和表皮葡萄球菌是咽部正常菌群。有3.5％實驗室未分離到卡他布蘭漢菌，7.7％實驗室未分離出嗜血桿菌。有3個實驗室報告金黃色葡萄球菌，可見凝固酶實驗存在問題，應同時用質(zhì)控菌株做陽性和陰性對照。

流感嗜血桿菌分離需要接種巧克力平板，5％CO2培養(yǎng)。12個實驗室報告副流感嗜血桿菌或嗜血桿菌屬。有兩種方法鑒定流感嗜血桿菌，先用血平板衛(wèi)星方法，確定衛(wèi)星試驗陽性后，做X因子，V因子和X+V因子試驗；或者再做MH平板衛(wèi)星試驗，陰性結(jié)果可報告流感嗜血桿菌，陽性報告副流感嗜血桿菌。

藥敏結(jié)果評價：

0704號標本肺炎克雷伯菌(ESBLs+)藥敏結(jié)果，依據(jù)CLSI（NCCLS）標準，應對肺炎克雷伯菌，產(chǎn)酸克雷伯菌，大腸埃希菌和奇異變形桿菌篩選和確認ESBLs試驗，頭孢噻肟，頭孢曲松耐藥，要做確認ESBLs試驗，頭孢噻肟/棒酸和頭孢噻肟抑菌環(huán)直徑之差>5mm，報告產(chǎn)ESBLs，所有青霉素類，頭孢菌素類和氨曲南報告耐藥。有27個實驗室頭孢他啶報告敏感或中介度；29個實驗室報告頭孢吡肟敏感或中介度；10個實驗室報告氨曲南敏感或中介度。

0705號標本

臨床上對流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和卡他布蘭漢菌常規(guī)應檢測β-內(nèi)酰胺酶，可以快速報告，指導臨床用藥。

β－內(nèi)酰胺酶結(jié)果：

卡他布蘭漢菌結(jié)果（陽性）正確率為94％，流感嗜血桿菌（陰性）正確率82％，偏低。流感嗜血桿菌的紙片法藥敏試驗對培養(yǎng)基要求是專用HTM培養(yǎng)基，在MH培養(yǎng)基中加入氯化血紅素、NAD和酵母粉（配制方法見NCCLS標準），5%CO2培養(yǎng)。

卡他布蘭漢菌201*年CLSI（NCCLS）有稀釋法的標準了。沒有推薦常規(guī)做藥敏實驗，主要用于流行病調(diào)查，和長期治療或嚴重感染患者。多數(shù)卡他布蘭漢菌產(chǎn)β－內(nèi)酰胺酶，對氨芐西林和阿莫西林耐藥。稀釋法藥敏抗生素包括：阿莫西林/棒酸，頭孢克羅，三代頭孢菌素，阿奇霉素，克拉霉素和紅霉素；環(huán)丙沙星，左氧氟沙星，四環(huán)素，克林霉素，復方新諾明，氯霉素和利福平。

衛(wèi)生部臨床檢驗中心

微生物室201*.04.20

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